細胞因子在體內(nèi)具有重要的病理作用,在感染、炎癥、自身免疫病、免疫缺陷疾病等狀態(tài)下,部分細胞因子會明顯變化,根據(jù)這些指標(biāo)可以判斷機體的免疫功能。血清、血漿或組織液中細胞因子檢測可以對疾病診斷和治療做出相應(yīng)評價,具有重要的應(yīng)用價值。廣泛應(yīng)用于細胞生物學(xué)、免疫學(xué)以及腫瘤學(xué)等領(lǐng)域的流式細胞術(shù)是細胞因子檢測的一種方法。
由于血清、細胞培養(yǎng)上清、積液中的細胞因子含量低,不容易檢測,加上樣本數(shù)量少,傳統(tǒng)的方法無法滿足多因子檢測。流式微球捕獲芯片技術(shù)(CBA)微量樣本多重蛋白定量技術(shù),是用流式細胞儀對多重蛋白進行定量檢測的方法,能夠同時對樣本中的多個指標(biāo)進行定性、定量檢測,可用于細胞因子檢測。
流式細胞儀技術(shù)(FCM)技術(shù)可以應(yīng)用流式細胞儀,結(jié)合單克隆抗體技術(shù)、免疫熒光染色技術(shù),對快速流動液體中的單細胞進行多種參數(shù)測量和分析。CBA檢測系統(tǒng)采用聚苯乙/烯熒光微球連結(jié)特定的捕獲抗體,捕捉待測物,同時再加入待測物的熒光抗體,三者形成夾心復(fù)合物,通過流式細胞儀進行檢測。流式細胞術(shù)的優(yōu)點是同時可以進行多參數(shù)檢測,快速并且信息量大。
流式細胞術(shù)檢測用于細胞因子檢測是一種相對快速、重復(fù)性好并能準(zhǔn)確定量的方法。但由于胞內(nèi)分析步驟復(fù)雜,涉及變異因素多,可能會出現(xiàn)結(jié)果不穩(wěn)定,較難重復(fù)等問題。
如在檢測血清時,由于血清成分復(fù)雜,細胞因子含量差距大,實驗中經(jīng)常會出現(xiàn)分群不明顯、微球聚集、濃度太低等現(xiàn)象,對實驗結(jié)果造成很大影響。如流式CBA法的微球由聚苯乙/烯材料制作而成,血清加入微球之后如果沒有充分渦旋,容易沉淀聚集,細胞因子不能充分跟微球結(jié)合,導(dǎo)致多群甚至聚集現(xiàn)象發(fā)生,檢測結(jié)果將是無效的。需要從制備混合微球開始到加入實驗管,直到上機檢測前每一步都必須充分渦旋,以避免微球發(fā)生聚集。