DNA/RNA提取試劑盒說明書
AllPureDNA/RNAKit
DNA/RNA提取試劑盒說明書
Cat.No. K0590
保存：室溫
組分說明
Cat.No. K0590
KitSize 50
BufferRL 35ml
BufferRW1 40ml
BufferRW2（concentrate） 11ml
RNase-FreeWater 10ml
BufferGW1（concentrate） 13ml
BufferGW2（concentrate） 15ml
BufferGE 15ml
SpinColumnDM 50
SpinColumnRM 50
CollectionTube（1.5ml） 100
CollectionTube（2ml） 150
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本試劑盒可用于從同一細(xì)胞或組織樣本中同時(shí)純化基因組 DNA 和總 RNA。由于不需要將樣本分成兩份用于不同的純化步驟，該試劑盒可最大限度的回收 DNA 和 RNA。純化的 DNA 和 RNA 被單獨(dú)洗脫并可直接用于各種下游實(shí)驗(yàn)。本試劑盒中不包含苯酚和氯仿等有毒物質(zhì)，無需乙醇沉淀，操作簡(jiǎn)單、快捷?；蚪M DNA 可用于 PCR、Real-timePCR、SouthernBlot、DotBlot、比較基因組雜交（CGH）、基因分析和 SNP 分析；總 RNA 可用于 RT-PCR、Real-timeRT-PCR、cDNA 的合成、NorthernBlot、DotBlot 等分析。
注意事項(xiàng)
1. 預(yù)防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面：
1) 使用無RNase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。
2) 玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時(shí)，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分鐘，用水*沖洗后高壓滅菌。
3) 配制溶液應(yīng)使用RNase-FreeWater。
4) 操作人員戴一次性口罩和手套，實(shí)驗(yàn)過程中要勤換手套。
2. 樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則影響提取DNA和RNA的質(zhì)量。樣品在BufferRL中，可于-70℃保存一個(gè)月。
3. BufferRL在使用前請(qǐng)加入β-巰基乙醇，1mlBufferRL加10 μl β-巰基乙醇。加入β-巰基乙醇的BufferRL室溫可保存1個(gè)月。
4. 第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說明在 BufferRW2、BufferGW1 和 BufferGW2 中加入無水乙醇。
5. 使用前請(qǐng)檢查 BufferRL 是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀，如有結(jié)晶或者沉淀，請(qǐng)于 56℃水浴重新溶解。
6. 所有離心步驟均使用臺(tái)式離心機(jī)，室溫下進(jìn)行。
自備試劑：β-巰基乙醇（新開封或提取 RNA 專用）、70%乙醇（用無 RNase 的水配制）、無水乙醇
操作步驟
1. 材料處理
1a. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液（最大提取量為107 個(gè)細(xì)胞）, 收集細(xì)胞，棄盡培養(yǎng)液，加入600μlBufferRL（用前檢查是否加入β-巰基乙醇），反復(fù)吹打使其充分裂解。
注意：一定要棄盡培養(yǎng)液，否則影響裂解和后續(xù)的核酸純化步驟。
1b. 取不大于30mg的動(dòng)物組織，液氮研磨成細(xì)粉末，加入600μlBufferRL（用前檢查是否加入β-巰基乙醇），或直接加入600μlBufferRL（用前檢查是否加入β-巰基乙醇），勻漿處理。
注意：勻漿要充分，否則影響RNA產(chǎn)量。
2. 將上步所得溶液12,000rpm（～13,400×g）離心3-5分鐘，小心的將上清加入到已裝入收集管（2mlCollectionTube）的吸附柱（SpinColumnDM）中，12,000rpm離心30-60 秒，收集濾液。將吸附柱DM放在一個(gè)新的2ml收集管
（2mlCollectionTube）中，室溫或4℃放置，待提DNA。
注意：確保吸附柱 DM上沒有液體殘留，如果有必要可以重復(fù)離心，直至所有的液體通過吸附柱DM的膜?？?/span>RNA提取
3. 向步驟2所得濾液中加入1倍體積的70%乙醇（無RNase的水配制），混勻。
4. 將上步所得溶液全部加入到已裝入收集管（2mlCollectionTube）的吸附柱（SpinColumnRM）中，若一次不能全部加完溶液，可分次轉(zhuǎn)入。12,000rpm離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱RM重新放回2ml收集管中。
5. 向吸附柱RM中加入700 μlBufferRW1,12,000rpm離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱RM重新放回2ml收集管中。
6.向吸附柱RM中加入500 μlBufferRW2（使用前檢查是否已加入無水乙醇）,12,000rpm離心20秒, 倒掉收集管中的廢液，將吸附柱RM重新放回2ml收集管中。
7. 重復(fù)步驟6。
8. 12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱RM置于室溫?cái)?shù)分鐘，以*晾干。
注意：此步驟目的是去除吸附柱RM中殘余的乙醇，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR等）。
9. 將吸附柱RM置于一個(gè)新的無RNase1.5ml離心管（CollectionTube1.5ml）中，向吸附柱RM的中間部位加入30-50μlRNase-FreeWater，室溫放置2-5分鐘，12,000rpm離心1分鐘，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：1）RNase-FreeWate體積不應(yīng)小于30 μl，體積過小影響回收率。
2）如果要提高RNA的產(chǎn)量，可用30-50 μl新的RNase-FreeWater重復(fù)步驟9。
3）如果要提高RNA濃度，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，重復(fù)步驟9。
基因組DNA 提取
10. 向吸附柱 DM 中加入 500 μlBufferGW1（使用前檢查是否加入無水乙醇）,12,000rpm 離心 20 秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱 DM 放回 2ml 收集管中。
11. 向吸附柱DM中加入500 μlBufferGW2（使用前檢查是否已加入無水乙醇）,12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱DM放回2ml 收集管中。
12. 12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱DM置于室溫?cái)?shù)分鐘，以*晾干。
注意：這一步的目的是將吸附柱DM中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（酶切、PCR等）。
13. 將吸附柱DM置于一個(gè)新的無RNase1.5ml離心管（CollectionTube1.5ml）中，向吸附柱DM的中間部位加入100 μlBufferGE，室溫放置2-5分鐘，12,000rpm離心2分鐘，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：1）BufferGE的體積不應(yīng)小于100 μl，體積過小影響回收率。
2）如果要提高DNA的產(chǎn)量，將100 μl新的BufferGE加至吸附柱上，重復(fù)步驟13。
3）如果要提高DNA濃度，可以將步驟15所得的DNA洗脫液重新加至吸附柱上，重復(fù)步驟13。
附表 1 吸附柱 DM 和吸附柱 RM 的規(guī)格說明
規(guī)格 吸附柱 DM 吸附柱 RM
最大結(jié)合能力 100µgDNA 100µgRNA
最大加樣量 700µl 700µl
結(jié)合核酸分子量 DNA15–30kb RNA>200 核苷酸
最小洗脫體積 100µl 30µl
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